細(xì)胞名稱(chēng)：HUVEC和A549融合株EA.hy926ATCC

細(xì)胞代次：P4

細(xì)胞規(guī)格：T25瓶（包郵）/2冷凍管（需加干冰運(yùn)輸費(fèi)）

細(xì)胞凍存：無(wú)血清凍存液

細(xì)胞傳代：第一次建議1:2

細(xì)胞收到后處理

培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿(mǎn)培養(yǎng)液并封好瓶口是運(yùn)輸細(xì)胞的最好辦法。收到細(xì)胞用75%酒精噴灑整個(gè)細(xì)胞瓶，消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi)嚴(yán)格無(wú)菌操作，將細(xì)胞瓶放入37℃、5%CO₂的培養(yǎng)箱中靜置3-4小時(shí)以穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)后再做處理。顯微鏡觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照保存（最好40x,100x,200x各一張），前三天照片是重要售后依據(jù)，不提供照片默認(rèn)收到狀態(tài)良好。（注意密封培養(yǎng)瓶放入培養(yǎng)箱時(shí)要將蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶的培養(yǎng)基，另外一瓶用自己配的培養(yǎng)基，以便進(jìn)行對(duì)比培養(yǎng)）

培養(yǎng)步驟

細(xì)胞傳代：如果未超過(guò)80%匯合度時(shí)，將瓶裝的培養(yǎng)液收集至離心管中，留5ml培養(yǎng)基，放入37℃、5%CO₂孵箱培養(yǎng)；如果細(xì)胞密度超80%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)，傳代具體步驟如下細(xì)胞傳代：

A1、對(duì)于懸浮細(xì)胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細(xì)胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻，將細(xì)胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數(shù)換液方式，棄半數(shù)培養(yǎng)基后，將剩余細(xì)胞懸起，將細(xì)胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基新皿中或者瓶中。

A2、懸浮細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，將T25 培養(yǎng)瓶中的懸液收集至離心管中1000rpm

離心5min；

2、棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml/支的雅吉生物無(wú)血清凍存液（C7001），混勻后加入凍存管中。（如：凍一支，加入 1ml 無(wú)血清凍存液即可）

3、將凍存細(xì)胞直接放入－80℃冰箱即可；如后期要將細(xì)胞轉(zhuǎn)入液氮罐中，需在-80℃冰箱存

放 24 小時(shí)以上。

B1、對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考如下方法：

1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。

2. 添加0.25%消化液約1-2ml至培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加5ml以上培養(yǎng)基終止消化。

3.輕輕吹打細(xì)胞，使之脫落后吸出，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基重懸。

4. 將細(xì)胞懸液按1：2的比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25瓶），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5%CO₂的細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

B2、貼壁細(xì)胞凍存：

1、細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時(shí)，棄T25培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用PBS清洗細(xì)胞一次；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀(guān)察，待細(xì)胞回縮變圓后加入5ml培養(yǎng)液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中，1000rpm離心 5min；

3、 棄上清，沉淀細(xì)胞加入1ml的雅吉生物無(wú)血清凍存液（貨號(hào)：C7001），混勻后加入凍存管中。

細(xì)胞復(fù)蘇：

1、從液氮中取出細(xì)胞凍存管（注意佩戴防護(hù)面具），快速將其置入 37℃水浴中解凍， 直至凍存管中無(wú)結(jié)晶，然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁；

2、將凍存管中的細(xì)胞移至含 5ml 培養(yǎng)基的15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、棄上清，沉淀用5ml培養(yǎng)基重懸，接種至T25培養(yǎng)瓶，放于37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

4、第二天，換用新鮮培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。

注意事項(xiàng)：有些細(xì)胞比較特殊，如貼壁不牢，在運(yùn)輸過(guò)程中發(fā)生容易細(xì)胞脫落，這是正?，F(xiàn)象。請(qǐng)將培養(yǎng)瓶所有培養(yǎng)液收集至離心管，1000rpm離心5min，收集上清作過(guò)渡培養(yǎng)（后期對(duì)比培養(yǎng)），沉淀加入消化液1-2ml，輕輕吹打，重懸，消化1-2分鐘后，加5ml培養(yǎng)基終止反應(yīng)。再離心，棄上清，加1-2ml培養(yǎng)基重懸。然后按1:2比例進(jìn)行分瓶傳代（兩個(gè)T25），補(bǔ)充新的培養(yǎng)基至5-8ml/瓶，最后放入37℃,5%CO₂細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒：MTT比色法是一種檢測(cè)細(xì)胞存活和生長(zhǎng)的方法，MTT細(xì)胞增殖及細(xì)胞毒性檢測(cè)試劑盒(MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit)被廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的檢測(cè)，MTT檢測(cè)原理為活細(xì)胞線(xiàn)粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍(lán)紫色Formazan并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能，在特定溶劑存在的情況下可以被溶解，然后通過(guò)酶標(biāo)儀可以測(cè)定570nm波長(zhǎng)附近的吸光度，細(xì)胞增殖越多越快，則吸光度越高；細(xì)胞毒性越大，則吸光度越低。該產(chǎn)品檢測(cè)本底低，靈敏度高，線(xiàn)性范圍寬。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

YS101CDU-145人前列腺癌細(xì)胞

YS102CHUVEC和A549融合株EA.hy926

YS103CEAC小鼠艾氏腹水癌細(xì)胞

YS104CEC-304人血管內(nèi)皮細(xì)胞

YS105CEC9706人食管癌細(xì)胞

YS106CEca-109人食管癌細(xì)胞

YS107CEJ人膀胱癌細(xì)胞

YS108CEL4小鼠淋巴瘤細(xì)胞

YS109C小鼠乳腺癌EMT-6

YS110CES-2癌細(xì)胞人卵巢透明細(xì)胞

YS111CFaDu人咽鱗癌細(xì)胞

YS112CGBC-SD人膽囊癌細(xì)胞

YS113CGES-1人胃粘膜細(xì)胞

YS114C肺腺癌GLC-82

YS115CNCI-H1299人肺腺癌細(xì)胞

YS116CH22小鼠肝癌細(xì)胞

YS117CH9c2(2-1)大鼠心肌細(xì)胞

YS118CHaCaT人正常皮膚細(xì)胞

YS119CHAL-01人急性混合型白血病細(xì)胞

YS120CHBZY-1大鼠腎內(nèi)膜細(xì)胞

YS121CHCC1937人乳腺癌細(xì)胞

YS122CHCC827肺癌細(xì)胞人非小細(xì)胞

YS123C肝癌HCC-9204

YS124CHCCLM3人高轉(zhuǎn)移肝癌細(xì)胞

YS125C低分化結(jié)腸腺癌HCT-116

YS126CHCT-15人結(jié)腸癌細(xì)胞

YS127CHCT-8人結(jié)腸癌細(xì)胞

YS128CHEC-1-A人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞

YS129CHEC-1-B人子宮內(nèi)膜腺癌細(xì)胞

YS130CHEL白血病細(xì)胞人紅白細(xì)胞

YS131CHeLa人宮頸癌細(xì)胞

YS132C宮頸癌HelaS3

YS133CHELF人胚肺成纖維細(xì)胞

YS134CHep3B2.1-7人肝癌細(xì)胞

YS136C肝癌Hep3B

YS137CHepG2人肝癌細(xì)胞

YS138CHES人胚皮膚成纖維樣細(xì)胞

YS139C(未分化)HGC-27人胃癌細(xì)胞

YS140CHK-2人腎近曲小管上皮細(xì)胞

YS141CHL-60人白血病細(xì)胞

YS142CHO-8910人卵巢癌細(xì)胞

YS143CHO-8910PM人高轉(zhuǎn)移卵巢癌細(xì)胞

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